page_banner

Новини

Часті питання про культуру клітин

1. Якщо я отримаю пробірку із замороженими клітинами, чи можу я помістити її безпосередньо в рідкий азот для зберігання?

У багатьох випадках клітини, транспортовані на сухому льоду (-80°C), можна знову помістити в рідкий азот, а потім швидко розморозити.Однак після такої обробки життєздатність клітин може бути знижена.Для деяких чутливих клітинних ліній це може ускладнити відновлення клітин.Вважається, що це явище пов’язане зі зміною структури кристалів льоду в клітинах в результаті зміни температури.Тому рекомендується розморожувати та культивувати клітини якнайшвидше після отримання.Зменшіть час зберігання при -80°C.Ця температура використовується лише для транспортування.

Культура клітин, що часто задають 1
Культура клітин, що часто задають 2
Культура клітин, що часто задають 4
Культура клітин, що часто задають 3

2. Яких заходів безпеки необхідно вжити при вилученні клітин з рідкого азоту для відновлення?

Клітинні кріопробірки в рідкому азоті, які не повністю герметичні та мають витік рідкого азоту, можуть спричинити вибух, якщо температура кріопробірки різко підвищиться під час розморожування.Тому під час видалення клітин із рідкого азоту рекомендується надягати захисні окуляри та рукавички.Для реанімації пробірку для заморожування слід постійно струшувати у водяній бані при 37 °C, щоб повністю розморозити розчин для заморожування протягом 1-2 хвилин.Після цього протріть пробірку ззовні спиртовою серветкою, потім перенесіть її на ультрачистий стіл і перенесіть клітини в центрифужну пробірку з додаванням 10 мл культурального середовища, центрифугуйте при 1000 об/хв протягом 5-10 хвилин, викиньте клітини надосадову рідину, додайте відповідну кількість культурального середовища, інокулюйте культуральний флакон та інкубуйте в інкубаторі з 5% CO2.

3. Чому клітини слід зберігати в паровій фазі бака з рідким азотом, а не в рідкій?

Клітини, що зберігаються в газовій фазі рідкого азоту, мають більшу ймовірність оживлення.Тоді як у рідкій фазі рідкого азоту, якщо пробірки для ліофілізації не запечатані належним чином або мають витоки, прямий контакт між клітинами та рідким азотом може поставити під загрозу життєздатність клітин після розморожування.

4. Як змінити культуральне середовище для суспензійних клітин?

Культивування суспензійних клітин можна здійснити шляхом простого додавання свіжого середовища (якщо дозволяє простір) або шляхом відділення клітин від старого середовища шляхом центрифугування (100xg протягом 5 хвилин) і подальшого ресуспендування осаджених клітин у свіжому середовищі.Однак для більшості суспензійних клітинних ліній просте додавання середовища є кращим методом.У будь-якому випадку середовище потрібно оновити, перш ніж клітини досягнуть найбільшої щільності насичення.Щільність насичення клітин коливається від 3 x 10 5 до 2 x 10 6 залежно від клітинної лінії та умов культивування (спокій або перемішування, рівні оксигенації тощо).Клітини повинні бути розведені до нижчої концентрації клітин, щоб забезпечити достатнє відновлення поживних речовин для підтримки логарифмічного росту клітин.Якщо середовище просто змінити без зменшення щільності клітин, клітини швидко виснажать середовище та гинуть.Якщо клітини розведені нижче їх найменшої щільності, вони увійдуть у лаг-фазу і ростуть дуже повільно або загинуть.Кожна суспензійна клітинна лінія має різну щільність насичення та інтервал пасажу, тому щоденний підрахунок клітин є способом моніторингу суспензійних клітинних ліній*.

5. Який рекомендований рівень CO2 для культури клітин?

Хоча рівні CO2 в системах клітинної культури коливаються від 0,03% до 40% (зазвичай близько 0,03% CO2 в атмосфері), дуже часто CO2 не додається в повітря або концентрація CO2 становить від 5% до 10%.Важливо відрегулювати концентрацію бікарбонату натрію в середовищі, щоб збалансувати рівень CO2 у газовій фазі.Клітини виробляють CO2 і потребують невеликої кількості вугільної кислоти для росту та виживання.Якщо CO2 не додається і клітини розмножуються, можна використовувати 4 мМ (0,34 г/л) безводного бікарбонату натрію.Однак на цьому етапі кришку культуральної колби слід затягнути.Якщо культуральна система потребує 5% або 10% CO2, використовуйте 23,5 мМ (1,97 г/л) або 47 мМ (3,95 г/л) бікарбонату натрію при 37°C відповідно з початковим рН приблизно 7,6.За цих умов колбу слід залишити без кришки або використовувати чашку Петрі для підтримки газової рівноваги.

6. Для чого деяким клітинам потрібен піруват натрію?Скільки пірувату натрію слід додати до середовища?

Піруват є метаболітом органічної кислоти в гліколітичному шляху*, який легко проникає в клітину та виходить з неї.Таким чином, додавання пірувату натрію до середовища забезпечує як джерело енергії, так і джерело вуглецю для анаболізму, допомагає підтримувати певні специфічні клітини, сприяє клонуванню клітин або необхідне, коли сироваткові концентрації в середовищі знижуються.Піруват натрію також допомагає зменшити цитотоксичність, спричинену флуоресценцією.Зазвичай піруват натрію додають у кінцевій концентрації 1 мМ.комерційно доступні розчини пірувату натрію – це зазвичай 100 мМ розчин для зберігання (100X).

Перекладено за допомогою www.DeepL.com/Translator (безкоштовна версія).


Час публікації: 21 червня 2022 р